真菌在藥實驗，怎樣確定真菌抗菌實驗時的指示菌
發(fā)布時間：2022-10-15 02:18
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本文目錄一覽怎樣確定真菌抗菌實驗時的指示菌2，真菌培養(yǎng)及簽定真菌藥敏試驗3，真菌培養(yǎng)及簽定真菌藥敏試驗4，檢測不同環(huán)境中的細菌和真菌實驗步驟5，藥用真菌的分離培養(yǎng)與菌種保藏是什么6，怎樣培養(yǎng)真菌和殺滅真菌7，在對細菌真菌的培養(yǎng)實驗時一般……
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1，怎樣確定真菌抗菌實驗時的指示菌
真菌（Fungus）在生物學分類上屬于藻菌植物中真菌超綱，具真核細胞型的微生物，它來們在自然界分布廣泛，絕大多自數對人有利，如釀酒 、制醬，發(fā)酵飼料，農田增肥，制造抗生素，生長蘑茹，食品加工及提供中草藥藥源（如靈芝、茯2113苓、冬蟲夏草等，都是真菌的產物或本身或利用真菌的 真菌作用所制備的）。對人類致病的真5261菌分淺部真菌和深部真菌，前者侵犯皮膚、毛發(fā)、指甲，為慢性，對治療有頑固性，但影響身體較4102小，后者可侵犯全身內臟，嚴重的可引起死亡。此外有些真菌寄生于糧食、飼1653料、食品中，能產生毒素引起中毒性真菌病。】:正從農田土壤中,利用高通量靶標菌抗真菌及其抗南方根結線蟲功能篩選技術,分離得到多株可拮抗植物病原真菌及毒殺植物線蟲的菌株200余株。通過高效菌株篩選...
2，真菌培養(yǎng)及簽定真菌藥敏試驗
培養(yǎng)，采樣后在常規(guī)的酵母用培養(yǎng)基如PDA中培養(yǎng)，加適量鏈霉素抑制細菌生長。培養(yǎng)出的微生物最簡單鑒定方法有兩個，一個是用試劑盒鑒定，基于培養(yǎng)特征和數據庫進行鑒定。另外就是基于PCR的特征片段后的核酸分子鑒定。藥敏實驗，培養(yǎng)出來后加各種藥物，這個有標準方法。
3，真菌培養(yǎng)及簽定真菌藥敏試驗
培養(yǎng)，采樣后在常規(guī)的酵母用培養(yǎng)基如PDA中培養(yǎng)，加適量鏈霉素抑制細菌生長。培養(yǎng)出的微生物最簡單鑒定方法有兩個，一個是用試劑盒鑒定，基于培養(yǎng)特征和數據庫進行鑒定。另外就是基于PCR的特征片段后的核酸分子鑒定。藥敏實驗，培養(yǎng)出來后加各種藥物，這個有標準方法。
4，檢測不同環(huán)境中的細菌和真菌實驗步驟
這個應該是你們自己的小實驗吧？你這個牛肉汁培養(yǎng)基，一般是檢測細菌的，不能檢測真菌吧？環(huán)境一般是自己選擇好后，再立題。如硬幣表面、自來水中、衣物表面、空氣中等。如下：立題：自來水中（其他環(huán)境亦可，自己選擇）的細菌檢測假設：自來水中存在細菌步驟：用無菌棉棒蘸取少量自來水，然后快速的將自來水涂布在牛肉汁培養(yǎng)基中，然后用透明膠帶將培養(yǎng)皿封口，在標簽紙上寫明日期、環(huán)境、培養(yǎng)人等信息。 將牛肉汁培養(yǎng)基放到25-37度的環(huán)境中，倒置（蓋子在下面），放置1-2天，每隔12小時觀察培養(yǎng)基中的變化?，F象：放置適宜的時間后，會在培養(yǎng)基表面發(fā)現數種形態(tài)各異的圓形菌落，這就是自來水中存在的細菌了，用放大鏡觀察細菌的形態(tài)，同時記錄一共有多少種細菌。結論：如果出現上述現象，驗證了之前的假設，自來水中確實存在細菌，共檢測到多少種細菌。
5，藥用真菌的分離培養(yǎng)與菌種保藏是什么
（冉硯珠）一、純菌種的分離培養(yǎng)為了得到某種藥用真菌的純菌種，必須將它從其周圍的其他生物或微生物中分離出來。分離工作要根據藥用真菌的特性，從分離方法、培養(yǎng)基的種類、培養(yǎng)條件的控制以及在培養(yǎng)基中是否添加某種抑制劑等等綜合考慮，否則達不到分離菌種的有效目的。純菌種的分離方法大致有三種：組織分離、孢子分離及寄主分離。（一）組織分離法利用幼嫩組織中的菌絲，在無菌條件下，接種在培養(yǎng)基上，重新恢復為沒有組織分化的菌絲體，這種方法分離得到的菌種生命力強，菌絲生長快，得到純菌的生活率較高。此法適應范圍較廣，特別是對有些孢子不易萌發(fā)或萌發(fā)速度不一致的種類以及菌核、菌索等組織，采用此法為宜。進行組織分離，事先要對分離材料進行選擇，要求材料必須是品系純正，品質優(yōu)良，幼嫩肥壯而無病蟲害，然后進行表面消毒處理。先用清水洗凈外面沾附的泥土或雜物，放入無菌操作室（柜）中的無菌器皿內，用表面消毒劑（如0.1—0.2%升汞、10%漂白粉、70—75%酒精、5%來蘇兒或2%甲醛等）溶液浸泡一定時間。消毒時間要根據消毒劑的特性和菌體組織的質地、大小而定。一般如菇類（香菇、蜜環(huán)菌）鮮嫩的組織，消毒時間要短，控制在0.5—1.0分鐘，這樣既不會傷害組織又能達到組織表面殺菌的目的；像表皮組織比較厚的豬苓菌核，在5%的來蘇兒溶液中泡半小時以上，不致影響生活力。升汞溶液殺菌力較強，組織經表面消毒后，必須再經無菌水沖洗，去掉附著的殘留藥物，以免影響菌體萌發(fā)生長。無菌水沖洗后要用滅菌濾紙吸去沾附的水分，用無菌刀將組織切割成約0.5cm2小塊，分別放置在預先滅過菌而裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿或試管中，一般每皿5塊左右，排開保持一定間隔，試管內僅放1塊為宜。培養(yǎng)時將皿底朝上，置24—28℃恒溫下培養(yǎng)數天，組織塊周圍就可長出新的菌絲，再經純化即可得到純菌種。表面消毒時，如方法掌握不當或無菌操作不嚴格，往往會造成污染，消毒過度則菌體本身生活力喪失而分離不出純菌種，分離多孔菌類或菌肉較肥厚的傘菌類真菌，也可不用藥劑浸泡，只要用70—75%酒精棉涂擦外皮后，去掉表皮，挑取內部組織塊直接進行分離。為了防止細菌感染，可將要分離的組織小塊用0.1—0.5%金霉素（或鏈霉素）浸蘸一下再移置。為防止培養(yǎng)基上污染細菌可在每毫升培養(yǎng)基內加入0.125mg氯霉素，因它較前兩種穩(wěn)定、耐高溫，可與培養(yǎng)基一同高壓滅菌。分離藥用真菌時，通常使用的培養(yǎng)基成分如下：馬鈴薯（去皮） 200g（切碎煮沸半小時過濾去渣）蔗糖 20g磷酸二氫鉀 3g硫酸鎂 1.5g維生素B1 10mg瓊脂 18g（加水至1000ml）除上述培養(yǎng)基外，也常用沙氏培養(yǎng)基或馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂培養(yǎng)基。（二）孢子分離法這是利用藥用真菌的菌褶或菌孔中著生的孢子，使其在無菌條件下彈射在適合生長的培養(yǎng)基上，并萌發(fā)生長成菌絲而得到純菌種的一種方法。這種方法在香菇、銀耳、茯苓等藥用真菌中分離應用。藥用真菌的有性孢子，都是由異性的細胞核，經核配后形成的，具雙親的遺傳性，變異性大，生命力強，適于育種工作采用，為防止雜菌感染，分離材料要嚴格消毒，對于子實層未外露的子實體，可浸入0.1—0.2%升汞溶液中2—3分鐘進行表面消毒。子實層外露的如香菇，為避免孢子殺傷，需用70—75%酒精對菌蓋、菌柄進行表面消毒，把子實體切去菌柄，插在金屬絲制成的支架上，一并放入培養(yǎng)皿中，外面套以玻璃缸或鐘形罩，經數小時后在培養(yǎng)皿內就可以收集到大量的孢子。此外也可以采取懸掛法。如銀耳，將耳瓣用清水洗凈后，放入無菌三角瓶或大試管內，以無菌水振蕩沖洗三次，取出放于無菌玻皿內，用濾紙吸去多余水分，剪一片耳瓣在滅過菌的細鐵絲鉤上，然后懸掛在倒有一薄層培養(yǎng)基的三角瓶中，耳瓣距基面2—3cm。在24—26℃下，經1—2天培養(yǎng)，就可在基面上隱約可見到白色孢子。再繼續(xù)培養(yǎng)2—3天就可以形成乳白色糊狀突起菌落。即銀耳芽孢菌種。由于這樣得到的菌種在木屑上菌絲不能萌發(fā)，故不能直接作為瓶栽的菌種。茯苓菌擔孢子分離是在其子實體發(fā)射孢子云時采用。用空中捕捉法，以試管口對準孢子云，使孢子落入試管培養(yǎng)基上?；蛴酶街ǎ词股仙逆咦釉聘街谂囵B(yǎng)基上面，在25℃下培養(yǎng)。如果以雜交育種為目的，要采用單孢子分離法。利用單孢子分離器進行單孢子分離，是目前先進手段，但設備昂貴，國內只有少數單位使用。較為廣泛應用的是菌液連續(xù)稀釋法。其方法是用無菌水把孢子沖散，最大限度地降低孢子在無菌水中的分布密度，最后使每滴水中只含1—2個孢子。然后用無菌注射器吸入孢子懸浮液，滴在斜面基表面，轉動試管，菌液便均勻分布在斜面上，經適溫培養(yǎng)，選優(yōu)良菌落進行純化。異宗結合擔子菌的單孢子分離物，雖然可繁殖菌絲，但不會形成子實體，故不能用于栽培生產。（三）寄主分離法此法也稱基內菌絲分離法。這是利用生長某種藥用真菌菌絲的基質做分離材料而獲得純菌種的一種方法。一般只有在上述兩種方法不能達到目的的情況下應用。被選做種子的子實體，若孢子已釋放完畢，子實體開始干枯或腐爛，菌絲失去活性，難以用孢子分離及組織分離法得到純菌種，或某些品種子實體的質地為膠質（銀耳、木耳）、革質（云芝）、木栓質（靈芝）、木質（針裂蹄）等類群均可采用此法。選擇菌木的標準：生長的子實體性狀優(yōu)良，基內菌絲發(fā)育旺盛，菌木未腐爛無雜菌污染。為防止細菌污染，除使用酸化培養(yǎng)基或加入抗菌素外，應使菌木風干失水。如耳木、菇木及苓木。以銀耳為例，選好耳木后，在子實體生長的部位，削下1—1.5cm厚的菌木一片，去掉樹皮，把菌木片放入0.1%升汞液中浸泡幾分鐘表面消毒，沖去藥液，吸干表面水分，放入無菌室（柜）的培養(yǎng)皿內，切去木片外層，將中間生長菌絲的部分，用無菌刀切成0.5cm2大小小塊，放入培養(yǎng)基表面進行適溫下培養(yǎng)和純化移植。由于藥用真菌種類不同，所形成的菌落外觀及結構也各有差異。因此鑒定所分離的菌種，除根據經驗外，更確切的是經過一段培養(yǎng)，待形成一些特殊結構，如菌絲束、菌核、菌索，尤其是子實體和孢子后方可判斷。二、菌種的保藏與復壯藥用真菌菌種是國家的重要資源與天然財富。也是藥用真菌生產與科研的基礎。藥用真菌的“種”不同，其藥用價值及培養(yǎng)條件也不同，就是同一“種”的不同菌株，也同樣有差異。在生產實踐中要選用符合生產要求的菌種，應具備藥效好，生產周期短、產量高、生活力強等特點。對有效成分明確的，應選用含量高的菌株，對有效成分未確定的，應選藥理作用顯著，無毒性反應及臨床療效好，產量高的菌種。生產上也可以根據一定的目的要求，應用菌體的自然變異加以選擇，不斷鞏固其特性育成新菌株或人為的定向培育改良菌種特性。如通過雜交或誘變育種選擇優(yōu)良菌株，使生產或有效物質含量達到新的水平。一個品系純正、品質優(yōu)良的菌種，常由于管理不善和傳代過多以及貯藏方法不當等原因，而引起優(yōu)良性狀的退化，這種現象稱為菌種退化。為防止菌種性狀的退化或恢復已經發(fā)生退化的菌種原有性狀，應采取科學的保藏方法與有效的復壯措施。（一）菌種的保藏方法藥用真菌菌種在干燥低溫、冷凍或減少氧氣含量等條件下保藏，使其代謝強度降低，維持菌種的休眠狀態(tài)，就可防止菌種退化。1.斜面低溫保藏除草菇等個別屬高溫型菌種，適于在15℃左右條件下保藏外，絕大多數種類都適合于低溫保藏。即把保存的菌種放于4—5℃左右冰箱中，經3—6個月轉管傳代一次。為恢復菌種的生活能力，需在使用前1—2天從冰箱中取出，置于常溫下進行活化轉管，不能直接使用。2.礦物油封藏法將上述斜面菌種，灌注一層滅菌的液體石蠟油，在三角燒瓶中滅菌時由于有蒸汽進入，會影響所保存菌種的質量，因此需要放在40℃溫箱中使水蒸氣蒸發(fā)后再使用。冷石蠟油用無菌吸管注入，注入量要足夠覆蓋整個斜面并高出培養(yǎng)物1cm，試管口棉塞用玻璃紙或塑料布包緊，放置冰箱或室溫保存。這種保存方法可以防止培養(yǎng)基失水及外界空氣進入，可降低新陳代謝，保持菌種活力，從而起到延長菌種使用壽命的效果。從石蠟管中挑取菌絲移置到新斜面上活化培養(yǎng)，以后可供生產用。此法可保存菌種1—2年不喪失活力。3.冷凍干燥法此法是采用真空、干燥和低溫三結合保藏菌種的方法，保存期可長達10—20年。具體方法：將保存真菌的孢子制成懸浮液，裝入安瓶管中，然后驟然降溫冷凍，并抽出空氣成真空狀態(tài)，使培養(yǎng)物以固體狀態(tài)升華脫水，熔封瓶口后，在低溫或室溫下保存。4.液氮超低溫保藏法超低溫能使代謝機能降低到最低水平而菌種不發(fā)生變異。實驗證明，采用這種新技術可以保藏所有的微生物菌種。液氮超低溫冰箱內的溫度可達-196—-130℃。超低溫保藏菌種具高效、使用范圍廣、操作簡便等優(yōu)點，但儀器價格昂貴，應用尚不普遍。除上述幾種保藏菌種方法外，還發(fā)現靈芝菌（赤芝、薄蓋靈芝）在麥麩及小米斜面上，于低溫（4℃左右）保存一年多仍具有生命力。若保存管的棉塞換以橡皮塞則可保存達4年以上。（二）菌種復壯藥用真菌的種類繁多，生物特性各異，任何一個選育出來的優(yōu)良品種，都常因多次傳代培養(yǎng)，長期進行人工培養(yǎng)或長期保藏而不進行轉管以及保藏條件不適等，菌種就會發(fā)生自然變異，出現退化現象。菌種退化的主要表現有，菌絲體生長緩慢，子實體性狀變壞，產量下降以及有效成分降低等。過多次傳代，會由于菌絲長期處在活躍的營養(yǎng)生長狀況，生命繁衍受到抑制，因此傳代次數應控制在2—3次之間。已經產生退化的菌種，有必要繼續(xù)保留和應用時，則必須進行菌種復壯。進行菌種復壯時，除應改善培養(yǎng)條件外，對已馴化的栽培種類，最可靠的方法就是進行有性繁殖（孢子分離）。銀耳菌絲菌種，經多次傳代后會出現生活力弱，出耳率低的退化現象?？衫眉尤胙挎叩姆椒◤蛪丫N。即取芽孢試管1支注入10ml無菌水，將芽孢懸液接入鋸木屑菌種中，這樣菌種出耳率會得到提高。芽孢菌種在木屑基中不能萌發(fā)菌絲，如加上1—2%過磷酸鈣和1—2%骨粉則可萌發(fā)菌絲。用重新接種原寄主的方法也可起復壯作用。
6，怎樣培養(yǎng)真菌和殺滅真菌
接種：就是把 需要培養(yǎng)的 細菌和 真菌與培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基接觸，就算完成了 接種。接種根據需接種的物體的狀態(tài)可以分為：固體接種、液體接種、氣體接種固體接種，就拿硬幣做例子，用無菌鑷子夾起硬幣，把硬幣放在培養(yǎng)皿上（如果想要實驗結果明顯，就把硬幣在培養(yǎng)基上用手指輕壓一下）液體接種，比如想檢測自來水，將把事先準備好的自來水用無菌棉棒浸濕，然后把 無菌棉棒在 培養(yǎng)基上來回涂抹均勻氣體接種，（就非常簡單啊?。┫霚y試車站內的空氣，那么就站在車站的某處，然后把培養(yǎng)皿的蓋子打開，使培養(yǎng)基暴露在空氣下5——10分鐘，就算是接種了試驗完了后，用福爾馬林溶液浸泡實驗器材，就可起到殺菌作用了。要知道“細菌真菌無處不在”哦···· :-) 希望給你帶來幫助哦摘 要:CO2培養(yǎng)箱是實驗室必備的儀器，但因其中需放置盛水容器而濕度較高，從而導致霉斑（經培養(yǎng)鑒定為絲狀真菌）快速生長而影響工作，有礙觀瞻和可能導致試驗樣本污染或院內感染擴散。雖使用了硫酸銅溶液、75％乙醇溶液或紫外線照射等多種消毒措施，仍然沒有顯著的效果。我們從文獻和實踐中發(fā)現，一般認為不適合在這種情況下使用的市售高氯消毒片當加大劑量和使用中和劑時，具有安全和徹底的去除這類霉斑的效果
7，在對細菌真菌的培養(yǎng)實驗時一般要用兩套帶有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿一
答案c試題分析：細菌和真菌的生活需要一定的條件，如水分、適宜的溫度、還有有機物，因此首先要配制含有營養(yǎng)物質的培養(yǎng)基，可以用牛肉汁加瓊脂熬制，然后把培養(yǎng)基和所有用具進行高溫滅菌，目的是殺死培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿中的細菌和真菌，以防雜菌對實驗的干擾，以免影響實驗結果，為防止高溫殺死細菌、真菌，要等冷卻后，在進行接種，接種后放在溫暖的地方進行恒溫培養(yǎng)，注意：定期觀察并詳細記錄實驗現象。考點：本題考查的是高溫滅菌的目的。點評：此題為基礎題，解答此類題目的關鍵是熟記高溫滅菌的目的要求，可以從培養(yǎng)細菌、真菌的方法步驟、高溫滅菌的目的方面來分析。對照實驗是指在研究一種條件對研究對象的影響時，所進行的除了這種條件不同之外，其他條件都相同的實驗．這種不同的條件就是實驗變量．一個探究實驗中只能有一個實驗變量，其他因素均處于相同理想狀態(tài)，這樣便于排除因其他因素的存在而影響、干擾實驗結果的可能．在接種前，培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿應經過高溫滅菌處理，以殺死其內混有的細菌或真菌的孢子等，以防雜菌對實驗的干擾，排除實驗外其它環(huán)境的污染．因此，在對細菌、真菌的培養(yǎng)實驗時，一般要用兩套帶有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿．一套接種培養(yǎng)，一套不接種，也放在相同條件下培養(yǎng)，這后一套的操作是對照作用，充分說明培養(yǎng)皿內的細菌來自手上．故選：B．
8，細菌真菌對照試驗中要控制什么
控制大腦 非得要我完善回答 我隨便答答不行嗎 我很忙耶為什么要檢定藥品中的細菌和真菌總數，當然是從藥品的安全性考慮。本來藥品是用于治療人的疾病的，如果帶有超過限度的菌類，就會給人體用藥帶來危害，甚至危及人的生命安全。 藥品的細菌、真菌檢查分為：“無菌檢查和微生物限度檢查”兩大類。具體看是什么劑型或作為什么用途的藥品。應該作“無菌檢查還是微生物限度檢查”，《中國藥典》對此有明確規(guī)定。摘錄如下： 一、需要做無菌檢驗的藥品制劑有：1.所有的注射劑 2.眼內注射溶液、眼內植入劑及供手術、傷口、角膜穿透傷用的眼用制劑 3.用于燒傷或嚴重創(chuàng)傷的軟膏劑、乳膏劑 4.植入劑 5.用于燒傷、創(chuàng)傷或潰瘍的氣霧劑 6.用于燒傷、創(chuàng)傷或潰瘍的噴霧劑 7.用于燒傷或創(chuàng)傷的局部用散劑 8.用于手術、耳部傷口或耳膜穿孔的滴耳劑與洗耳劑 9.用于手術創(chuàng)傷的鼻用制劑 10.沖洗劑 11.用于嚴重創(chuàng)傷的凝膠劑。 二、需要做微生物限度檢驗的制劑有：(1).所有的中藥制劑都要求做微生物限度檢查（做過無菌檢驗的除外 (2).除中藥制劑之外的丸劑、膠囊劑、顆粒劑、部分片劑不要求做微生物限度檢查 (3).要求做微生物限度檢查的制劑還有：1.片劑的口腔貼片、陰道片、陰道泡騰片、外用可溶片 2.栓劑 3.酊劑 4.軟膏劑、乳膏劑、糊劑 5.眼用制劑的液體制劑、眼用半固體及固體制劑 6糖漿劑 7.氣霧劑、粉霧劑、噴霧劑 8.膜劑 9.口服溶液、口服混懸劑、口服乳劑 10.散劑 11.耳用制劑 12.鼻用制劑 13.洗劑、灌腸劑 14.搽劑、涂劑、涂膜劑 15.凝膠劑。16.貼劑。 《中國藥典》里都有規(guī)定的。 參考資料：參見《中國藥典》
9，真菌的載片培養(yǎng)和形態(tài)觀察實驗思考題
答：1、真菌的劃線分離培養(yǎng) 培養(yǎng)基：將沙堡瓊脂培養(yǎng)基融化后，冷卻至45攝氏度，注入無菌平皿中，每皿15~20ml，做成平板備用。 接種：取待分離的材料少許，投入無菌水試管中，振蕩，使分離菌懸浮于水中，將接種環(huán)火焰滅菌后冷卻，取上述懸液，進行平板劃線分離。 培養(yǎng)與觀察：劃線完畢后，置于28攝氏度溫箱培養(yǎng)2~5天，待形成子實器官后，取單個菌落部分，制片鏡檢。若只有一種菌，既得純培養(yǎng)物。如有雜菌可取培養(yǎng)物少許制成懸液，用作劃線分離，有時反復多次可獲得純種。也可在放大鏡下觀察，用無菌鑷子夾取一段分離的真菌菌絲，在平板上分離培養(yǎng)，即可得到真菌的純培養(yǎng)物。2、真菌在固體培養(yǎng)基上的生長表現： 酵母菌在固體培養(yǎng)基上菌落呈油脂狀或蠟質狀，表面光滑、濕潤、粘稠，有的表面呈現粉粒狀，粗糙或褶皺，菌落邊緣整齊、缺損或帶絲狀。菌落顏色有乳白色、黃色、紅色等。將不同的霉菌在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)2~5d，可見霉菌有絨毛狀、絮狀、繩索狀等。大小依霉菌種類而異，很多霉菌的孢子和菌絲能產生色素，致使菌落表面、背面甚至培養(yǎng)基呈現不同的顏色，如黃色、綠色、黑色、橙色等。3、（1）酵母菌水浸片的制備：將美藍染色液或蒸餾水滴于干凈的載玻片中央，用接種環(huán)以無菌及操作取培養(yǎng)48h的酵母菌少許，均勻涂于液滴中，染色2~3min后加蓋玻片。注意切勿產生氣泡，然后低倍鏡和高倍鏡觀察其細胞形態(tài)、芽殖方式，注意酵母菌的形態(tài)、大小和芽體，同時可以根據是否染上顏色來區(qū)別死活細胞。 （2）挑取真菌孢子接入盛有滅菌水的試管中，震蕩試管制成孢子懸液，用滅菌滴管吸取滅菌后融化的固體培養(yǎng)基少許，滴于載玻片中央用接種環(huán)將孢子懸液接種在培養(yǎng)基四周將玻片加在培養(yǎng)基上，輕輕壓一下，在適宜溫度下培養(yǎng)，定期取出，低倍鏡下觀察孢子的著生狀態(tài)，菌絲的生長狀況等。
10，農藥對真菌抑制作用的試驗步驟
實驗原理： 培養(yǎng)基是供微生物生長的基物，分液體和固體兩種。按成分又可分為天然培養(yǎng)基、半組合培養(yǎng)基和組合培養(yǎng)基。培養(yǎng)真菌所用的培養(yǎng)基一般用馬鈴薯培養(yǎng)基，它是半組合培養(yǎng)基，制作比較簡單，且能夠完全滿足微生物的營養(yǎng)要求?！ 缇菤⑺浪形⑸?，保證培養(yǎng)基不被雜菌污染的重要手段之一。滅菌的方法有四種：熱力滅菌、過濾滅菌、化學滅菌和物理滅菌。熱力滅菌在微生物滅菌中占主要地位，分干熱滅菌和濕熱滅菌。干熱滅菌是利用熱空氣來滅菌，將玻璃器皿等放入烘箱中加熱，一般用160-170℃處理1小時或150℃處理2小時，適用于經高溫處理不易損壞的干燥物質。濕熱滅菌，即高壓蒸汽滅菌，是將滅菌物放入滅菌鍋內，維持一定的蒸汽壓力，一般為1公斤/cm2左右（相當于121℃），維持半小時，以確保殺死所有微生物，適用于高溫高壓下不易分解變質的物質和玻璃器皿。濕熱滅菌比干熱滅菌效率高?！ 〔≡臃N培養(yǎng)是殺菌劑毒力測定經常進行的工作之一，因培養(yǎng)基性狀不同，可采用不同的接種方法。本實驗是練習在固體培養(yǎng)基上接種。固體培養(yǎng)基的接種方法分傾注和斜面兩種接種方法。 接種后的菌種，必須放在適溫下培養(yǎng)，在培養(yǎng)期間注意觀察菌種的生長情況和有無雜菌污染，溫度要保持恒溫，培養(yǎng)成熟的菌種必須很好地保存?！ ≈饕獌x器及試材： 1、實驗器皿：培養(yǎng)皿、容量瓶、移液管、無菌水、PDA培養(yǎng)基 [注：以上器皿須經滅菌。] 2、實驗儀器：超凈工作臺、滅菌鍋、培養(yǎng)箱、打孔器、酒精燈等?！ 嶒灧椒ㄅc步驟： ?。ㄒ唬?、培養(yǎng)基的制作： 1、培養(yǎng)基的組成（PDA）： 去皮馬鈴薯塊 200克 葡萄糖（或蔗糖） 10-20克 瓊脂17-20克 水1000ml 2、步驟： ?。?）、在大燒杯中加入1000ml的水，作上標記； ?。?）、稱取去皮馬鈴薯200克，切成小塊，放入盛有水的燒杯中，煮沸30分鐘左右，將薯塊撈出，留下汁液； （3）、稱取17-20克瓊脂（事先用水浸泡），加入燒杯中，煮溶后，稱取葡萄糖（或蔗糖）10-20克，加入汁液中溶解?！ 。?）、加水至標記處，趁熱用雙層紗布過濾； （5）、將制好的培養(yǎng)基在未凝固前及時分裝?！ 。ǘ?、濕熱滅菌： 1、在滅菌鍋內加入去離子水到指定高度； 2、將須滅菌的物品放入滅菌鍋內，將蓋封閉加熱； 3、當氣壓表指到0.3/ cm2 時，排出鍋內空氣； 4、當氣壓升到所須壓力（1公斤/ cm2 ，溫度121℃）時，維持壓力半小時； 5、滅菌完畢，緩慢放氣； 6、取出鍋內培養(yǎng)基，試管作成斜面，以備接種用。 ?。ㄈ⒉≡臃N和培養(yǎng)： 1、試管斜面接種，用左手握好裝有斜面培養(yǎng)基的試管和菌種試管的底部，右手拔出棉塞，靠近酒精燈火焰，將接種針在酒精燈焰上灼燒后，直接挑取少量菌絲和孢子或連同帶菌的培養(yǎng)基小塊，放入斜面培養(yǎng)基試管內，輕輕涂抹在斜面上。并在試管上注明菌種名稱、接種日期、組名?！ 嶒炞⒁馐马棧骸 ?、 注意滅菌操作的方法和滅菌鍋的使用方法?！ ?、 病原菌的接種實驗要注意無菌操作，整個實驗操作過程在無菌操作臺上完成?！ 嶒灲Y果處理： 將接種后的菌種，放在適溫下（28℃培養(yǎng)箱中）培養(yǎng)。并在培養(yǎng)期間注意觀察菌種的生長情況和有無雜菌污染。多得很，一般的農藥銷售點都有，多菌靈 甲基硫菌靈 甲基托布津 殺毒礬 百菌清都行，出名的有瑞士先正達 山東曹達
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