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            真菌在藥實(shí)驗(yàn)，怎樣確定真菌抗菌實(shí)驗(yàn)時(shí)的指示菌 
        

    





    

        

            
真菌在藥實(shí)驗(yàn)，怎樣確定真菌抗菌實(shí)驗(yàn)時(shí)的指示菌 


            

                發(fā)布時(shí)間：2022-10-15 02:18
                編輯：網(wǎng)絡(luò) 
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                    本文目錄一覽怎樣確定真菌抗菌實(shí)驗(yàn)時(shí)的指示菌2，真菌培養(yǎng)及簽定真菌藥敏試驗(yàn)3，真菌培養(yǎng)及簽定真菌藥敏試驗(yàn)4，檢測不同環(huán)境中的細(xì)菌和真菌實(shí)驗(yàn)步驟5，藥用真菌的分離培養(yǎng)與菌種保藏是什么6，怎樣培養(yǎng)真菌和殺滅真菌7，在對細(xì)菌真菌的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)時(shí)一般……
                

            


            

               
                
本文目錄一覽
1，怎樣確定真菌抗菌實(shí)驗(yàn)時(shí)的指示菌


真菌（Fungus）在生物學(xué)分類上屬于藻菌植物中真菌超綱，具真核細(xì)胞型的微生物，它來們在自然界分布廣泛，絕大多自數(shù)對人有利，如釀酒 、制醬，發(fā)酵飼料，農(nóng)田增肥，制造抗生素，生長蘑茹，食品加工及提供中草藥藥源（如靈芝、茯2113苓、冬蟲夏草等，都是真菌的產(chǎn)物或本身或利用真菌的  真菌作用所制備的）。對人類致病的真5261菌分淺部真菌和深部真菌，前者侵犯皮膚、毛發(fā)、指甲，為慢性，對治療有頑固性，但影響身體較4102小，后者可侵犯全身內(nèi)臟，嚴(yán)重的可引起死亡。此外有些真菌寄生于糧食、飼1653料、食品中，能產(chǎn)生毒素引起中毒性真菌病。
】:正從農(nóng)田土壤中,利用高通量靶標(biāo)菌抗真菌及其抗南方根結(jié)線蟲功能篩選技術(shù),分離得到多株可拮抗植物病原真菌及毒殺植物線蟲的菌株200余株。通過高效菌株篩選...
真菌在藥實(shí)驗(yàn)


2，真菌培養(yǎng)及簽定真菌藥敏試驗(yàn)









培養(yǎng)，采樣后在常規(guī)的酵母用培養(yǎng)基如PDA中培養(yǎng)，加適量鏈霉素抑制細(xì)菌生長。培養(yǎng)出的微生物最簡單鑒定方法有兩個(gè)，一個(gè)是用試劑盒鑒定，基于培養(yǎng)特征和數(shù)據(jù)庫進(jìn)行鑒定。另外就是基于PCR的特征片段后的核酸分子鑒定。藥敏實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)出來后加各種藥物，這個(gè)有標(biāo)準(zhǔn)方法。


真菌在藥實(shí)驗(yàn)


3，真菌培養(yǎng)及簽定真菌藥敏試驗(yàn)


培養(yǎng)，采樣后在常規(guī)的酵母用培養(yǎng)基如PDA中培養(yǎng)，加適量鏈霉素抑制細(xì)菌生長。培養(yǎng)出的微生物最簡單鑒定方法有兩個(gè)，一個(gè)是用試劑盒鑒定，基于培養(yǎng)特征和數(shù)據(jù)庫進(jìn)行鑒定。另外就是基于PCR的特征片段后的核酸分子鑒定。藥敏實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)出來后加各種藥物，這個(gè)有標(biāo)準(zhǔn)方法。
真菌在藥實(shí)驗(yàn)


4，檢測不同環(huán)境中的細(xì)菌和真菌實(shí)驗(yàn)步驟


這個(gè)應(yīng)該是你們自己的小實(shí)驗(yàn)吧？你這個(gè)牛肉汁培養(yǎng)基，一般是檢測細(xì)菌的，不能檢測真菌吧？環(huán)境一般是自己選擇好后，再立題。如硬幣表面、自來水中、衣物表面、空氣中等。如下：立題：自來水中（其他環(huán)境亦可，自己選擇）的細(xì)菌檢測假設(shè)：自來水中存在細(xì)菌步驟：用無菌棉棒蘸取少量自來水，然后快速的將自來水涂布在牛肉汁培養(yǎng)基中，然后用透明膠帶將培養(yǎng)皿封口，在標(biāo)簽紙上寫明日期、環(huán)境、培養(yǎng)人等信息。          將牛肉汁培養(yǎng)基放到25-37度的環(huán)境中，倒置（蓋子在下面），放置1-2天，每隔12小時(shí)觀察培養(yǎng)基中的變化?，F(xiàn)象：放置適宜的時(shí)間后，會(huì)在培養(yǎng)基表面發(fā)現(xiàn)數(shù)種形態(tài)各異的圓形菌落，這就是自來水中存在的細(xì)菌了，用放大鏡觀察細(xì)菌的形態(tài)，同時(shí)記錄一共有多少種細(xì)菌。結(jié)論：如果出現(xiàn)上述現(xiàn)象，驗(yàn)證了之前的假設(shè)，自來水中確實(shí)存在細(xì)菌，共檢測到多少種細(xì)菌。


5，藥用真菌的分離培養(yǎng)與菌種保藏是什么









（冉硯珠）一、純菌種的分離培養(yǎng)為了得到某種藥用真菌的純菌種，必須將它從其周圍的其他生物或微生物中分離出來。分離工作要根據(jù)藥用真菌的特性，從分離方法、培養(yǎng)基的種類、培養(yǎng)條件的控制以及在培養(yǎng)基中是否添加某種抑制劑等等綜合考慮，否則達(dá)不到分離菌種的有效目的。純菌種的分離方法大致有三種：組織分離、孢子分離及寄主分離。（一）組織分離法利用幼嫩組織中的菌絲，在無菌條件下，接種在培養(yǎng)基上，重新恢復(fù)為沒有組織分化的菌絲體，這種方法分離得到的菌種生命力強(qiáng)，菌絲生長快，得到純菌的生活率較高。此法適應(yīng)范圍較廣，特別是對有些孢子不易萌發(fā)或萌發(fā)速度不一致的種類以及菌核、菌索等組織，采用此法為宜。進(jìn)行組織分離，事先要對分離材料進(jìn)行選擇，要求材料必須是品系純正，品質(zhì)優(yōu)良，幼嫩肥壯而無病蟲害，然后進(jìn)行表面消毒處理。先用清水洗凈外面沾附的泥土或雜物，放入無菌操作室（柜）中的無菌器皿內(nèi)，用表面消毒劑（如0.1—0.2%升汞、10%漂白粉、70—75%酒精、5%來蘇兒或2%甲醛等）溶液浸泡一定時(shí)間。消毒時(shí)間要根據(jù)消毒劑的特性和菌體組織的質(zhì)地、大小而定。一般如菇類（香菇、蜜環(huán)菌）鮮嫩的組織，消毒時(shí)間要短，控制在0.5—1.0分鐘，這樣既不會(huì)傷害組織又能達(dá)到組織表面殺菌的目的；像表皮組織比較厚的豬苓菌核，在5%的來蘇兒溶液中泡半小時(shí)以上，不致影響生活力。升汞溶液殺菌力較強(qiáng)，組織經(jīng)表面消毒后，必須再經(jīng)無菌水沖洗，去掉附著的殘留藥物，以免影響菌體萌發(fā)生長。無菌水沖洗后要用滅菌濾紙吸去沾附的水分，用無菌刀將組織切割成約0.5cm2小塊，分別放置在預(yù)先滅過菌而裝有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿或試管中，一般每皿5塊左右，排開保持一定間隔，試管內(nèi)僅放1塊為宜。培養(yǎng)時(shí)將皿底朝上，置24—28℃恒溫下培養(yǎng)數(shù)天，組織塊周圍就可長出新的菌絲，再經(jīng)純化即可得到純菌種。表面消毒時(shí)，如方法掌握不當(dāng)或無菌操作不嚴(yán)格，往往會(huì)造成污染，消毒過度則菌體本身生活力喪失而分離不出純菌種，分離多孔菌類或菌肉較肥厚的傘菌類真菌，也可不用藥劑浸泡，只要用70—75%酒精棉涂擦外皮后，去掉表皮，挑取內(nèi)部組織塊直接進(jìn)行分離。為了防止細(xì)菌感染，可將要分離的組織小塊用0.1—0.5%金霉素（或鏈霉素）浸蘸一下再移置。為防止培養(yǎng)基上污染細(xì)菌可在每毫升培養(yǎng)基內(nèi)加入0.125mg氯霉素，因它較前兩種穩(wěn)定、耐高溫，可與培養(yǎng)基一同高壓滅菌。分離藥用真菌時(shí)，通常使用的培養(yǎng)基成分如下：馬鈴薯（去皮） 200g（切碎煮沸半小時(shí)過濾去渣）蔗糖 20g磷酸二氫鉀 3g硫酸鎂 1.5g維生素B1 10mg瓊脂 18g（加水至1000ml）除上述培養(yǎng)基外，也常用沙氏培養(yǎng)基或馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂培養(yǎng)基。（二）孢子分離法這是利用藥用真菌的菌褶或菌孔中著生的孢子，使其在無菌條件下彈射在適合生長的培養(yǎng)基上，并萌發(fā)生長成菌絲而得到純菌種的一種方法。這種方法在香菇、銀耳、茯苓等藥用真菌中分離應(yīng)用。藥用真菌的有性孢子，都是由異性的細(xì)胞核，經(jīng)核配后形成的，具雙親的遺傳性，變異性大，生命力強(qiáng)，適于育種工作采用，為防止雜菌感染，分離材料要嚴(yán)格消毒，對于子實(shí)層未外露的子實(shí)體，可浸入0.1—0.2%升汞溶液中2—3分鐘進(jìn)行表面消毒。子實(shí)層外露的如香菇，為避免孢子殺傷，需用70—75%酒精對菌蓋、菌柄進(jìn)行表面消毒，把子實(shí)體切去菌柄，插在金屬絲制成的支架上，一并放入培養(yǎng)皿中，外面套以玻璃缸或鐘形罩，經(jīng)數(shù)小時(shí)后在培養(yǎng)皿內(nèi)就可以收集到大量的孢子。此外也可以采取懸掛法。如銀耳，將耳瓣用清水洗凈后，放入無菌三角瓶或大試管內(nèi)，以無菌水振蕩沖洗三次，取出放于無菌玻皿內(nèi)，用濾紙吸去多余水分，剪一片耳瓣在滅過菌的細(xì)鐵絲鉤上，然后懸掛在倒有一薄層培養(yǎng)基的三角瓶中，耳瓣距基面2—3cm。在24—26℃下，經(jīng)1—2天培養(yǎng)，就可在基面上隱約可見到白色孢子。再繼續(xù)培養(yǎng)2—3天就可以形成乳白色糊狀突起菌落。即銀耳芽孢菌種。由于這樣得到的菌種在木屑上菌絲不能萌發(fā)，故不能直接作為瓶栽的菌種。茯苓菌擔(dān)孢子分離是在其子實(shí)體發(fā)射孢子云時(shí)采用。用空中捕捉法，以試管口對準(zhǔn)孢子云，使孢子落入試管培養(yǎng)基上?；蛴酶街?，即使上升的孢子云附著在培養(yǎng)基上面，在25℃下培養(yǎng)。如果以雜交育種為目的，要采用單孢子分離法。利用單孢子分離器進(jìn)行單孢子分離，是目前先進(jìn)手段，但設(shè)備昂貴，國內(nèi)只有少數(shù)單位使用。較為廣泛應(yīng)用的是菌液連續(xù)稀釋法。其方法是用無菌水把孢子沖散，最大限度地降低孢子在無菌水中的分布密度，最后使每滴水中只含1—2個(gè)孢子。然后用無菌注射器吸入孢子懸浮液，滴在斜面基表面，轉(zhuǎn)動(dòng)試管，菌液便均勻分布在斜面上，經(jīng)適溫培養(yǎng)，選優(yōu)良菌落進(jìn)行純化。異宗結(jié)合擔(dān)子菌的單孢子分離物，雖然可繁殖菌絲，但不會(huì)形成子實(shí)體，故不能用于栽培生產(chǎn)。（三）寄主分離法此法也稱基內(nèi)菌絲分離法。這是利用生長某種藥用真菌菌絲的基質(zhì)做分離材料而獲得純菌種的一種方法。一般只有在上述兩種方法不能達(dá)到目的的情況下應(yīng)用。被選做種子的子實(shí)體，若孢子已釋放完畢，子實(shí)體開始干枯或腐爛，菌絲失去活性，難以用孢子分離及組織分離法得到純菌種，或某些品種子實(shí)體的質(zhì)地為膠質(zhì)（銀耳、木耳）、革質(zhì)（云芝）、木栓質(zhì)（靈芝）、木質(zhì)（針裂蹄）等類群均可采用此法。選擇菌木的標(biāo)準(zhǔn)：生長的子實(shí)體性狀優(yōu)良，基內(nèi)菌絲發(fā)育旺盛，菌木未腐爛無雜菌污染。為防止細(xì)菌污染，除使用酸化培養(yǎng)基或加入抗菌素外，應(yīng)使菌木風(fēng)干失水。如耳木、菇木及苓木。以銀耳為例，選好耳木后，在子實(shí)體生長的部位，削下1—1.5cm厚的菌木一片，去掉樹皮，把菌木片放入0.1%升汞液中浸泡幾分鐘表面消毒，沖去藥液，吸干表面水分，放入無菌室（柜）的培養(yǎng)皿內(nèi)，切去木片外層，將中間生長菌絲的部分，用無菌刀切成0.5cm2大小小塊，放入培養(yǎng)基表面進(jìn)行適溫下培養(yǎng)和純化移植。由于藥用真菌種類不同，所形成的菌落外觀及結(jié)構(gòu)也各有差異。因此鑒定所分離的菌種，除根據(jù)經(jīng)驗(yàn)外，更確切的是經(jīng)過一段培養(yǎng)，待形成一些特殊結(jié)構(gòu)，如菌絲束、菌核、菌索，尤其是子實(shí)體和孢子后方可判斷。二、菌種的保藏與復(fù)壯藥用真菌菌種是國家的重要資源與天然財(cái)富。也是藥用真菌生產(chǎn)與科研的基礎(chǔ)。藥用真菌的“種”不同，其藥用價(jià)值及培養(yǎng)條件也不同，就是同一“種”的不同菌株，也同樣有差異。在生產(chǎn)實(shí)踐中要選用符合生產(chǎn)要求的菌種，應(yīng)具備藥效好，生產(chǎn)周期短、產(chǎn)量高、生活力強(qiáng)等特點(diǎn)。對有效成分明確的，應(yīng)選用含量高的菌株，對有效成分未確定的，應(yīng)選藥理作用顯著，無毒性反應(yīng)及臨床療效好，產(chǎn)量高的菌種。生產(chǎn)上也可以根據(jù)一定的目的要求，應(yīng)用菌體的自然變異加以選擇，不斷鞏固其特性育成新菌株或人為的定向培育改良菌種特性。如通過雜交或誘變育種選擇優(yōu)良菌株，使生產(chǎn)或有效物質(zhì)含量達(dá)到新的水平。一個(gè)品系純正、品質(zhì)優(yōu)良的菌種，常由于管理不善和傳代過多以及貯藏方法不當(dāng)?shù)仍?，而引起?yōu)良性狀的退化，這種現(xiàn)象稱為菌種退化。為防止菌種性狀的退化或恢復(fù)已經(jīng)發(fā)生退化的菌種原有性狀，應(yīng)采取科學(xué)的保藏方法與有效的復(fù)壯措施。（一）菌種的保藏方法藥用真菌菌種在干燥低溫、冷凍或減少氧氣含量等條件下保藏，使其代謝強(qiáng)度降低，維持菌種的休眠狀態(tài)，就可防止菌種退化。1.斜面低溫保藏除草菇等個(gè)別屬高溫型菌種，適于在15℃左右條件下保藏外，絕大多數(shù)種類都適合于低溫保藏。即把保存的菌種放于4—5℃左右冰箱中，經(jīng)3—6個(gè)月轉(zhuǎn)管傳代一次。為恢復(fù)菌種的生活能力，需在使用前1—2天從冰箱中取出，置于常溫下進(jìn)行活化轉(zhuǎn)管，不能直接使用。2.礦物油封藏法將上述斜面菌種，灌注一層滅菌的液體石蠟油，在三角燒瓶中滅菌時(shí)由于有蒸汽進(jìn)入，會(huì)影響所保存菌種的質(zhì)量，因此需要放在40℃溫箱中使水蒸氣蒸發(fā)后再使用。冷石蠟油用無菌吸管注入，注入量要足夠覆蓋整個(gè)斜面并高出培養(yǎng)物1cm，試管口棉塞用玻璃紙或塑料布包緊，放置冰箱或室溫保存。這種保存方法可以防止培養(yǎng)基失水及外界空氣進(jìn)入，可降低新陳代謝，保持菌種活力，從而起到延長菌種使用壽命的效果。從石蠟管中挑取菌絲移置到新斜面上活化培養(yǎng)，以后可供生產(chǎn)用。此法可保存菌種1—2年不喪失活力。3.冷凍干燥法此法是采用真空、干燥和低溫三結(jié)合保藏菌種的方法，保存期可長達(dá)10—20年。具體方法：將保存真菌的孢子制成懸浮液，裝入安瓶管中，然后驟然降溫冷凍，并抽出空氣成真空狀態(tài)，使培養(yǎng)物以固體狀態(tài)升華脫水，熔封瓶口后，在低溫或室溫下保存。4.液氮超低溫保藏法超低溫能使代謝機(jī)能降低到最低水平而菌種不發(fā)生變異。實(shí)驗(yàn)證明，采用這種新技術(shù)可以保藏所有的微生物菌種。液氮超低溫冰箱內(nèi)的溫度可達(dá)-196—-130℃。超低溫保藏菌種具高效、使用范圍廣、操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，但儀器價(jià)格昂貴，應(yīng)用尚不普遍。除上述幾種保藏菌種方法外，還發(fā)現(xiàn)靈芝菌（赤芝、薄蓋靈芝）在麥麩及小米斜面上，于低溫（4℃左右）保存一年多仍具有生命力。若保存管的棉塞換以橡皮塞則可保存達(dá)4年以上。（二）菌種復(fù)壯藥用真菌的種類繁多，生物特性各異，任何一個(gè)選育出來的優(yōu)良品種，都常因多次傳代培養(yǎng)，長期進(jìn)行人工培養(yǎng)或長期保藏而不進(jìn)行轉(zhuǎn)管以及保藏條件不適等，菌種就會(huì)發(fā)生自然變異，出現(xiàn)退化現(xiàn)象。菌種退化的主要表現(xiàn)有，菌絲體生長緩慢，子實(shí)體性狀變壞，產(chǎn)量下降以及有效成分降低等。過多次傳代，會(huì)由于菌絲長期處在活躍的營養(yǎng)生長狀況，生命繁衍受到抑制，因此傳代次數(shù)應(yīng)控制在2—3次之間。已經(jīng)產(chǎn)生退化的菌種，有必要繼續(xù)保留和應(yīng)用時(shí)，則必須進(jìn)行菌種復(fù)壯。進(jìn)行菌種復(fù)壯時(shí)，除應(yīng)改善培養(yǎng)條件外，對已馴化的栽培種類，最可靠的方法就是進(jìn)行有性繁殖（孢子分離）。銀耳菌絲菌種，經(jīng)多次傳代后會(huì)出現(xiàn)生活力弱，出耳率低的退化現(xiàn)象?？衫眉尤胙挎叩姆椒◤?fù)壯菌種。即取芽孢試管1支注入10ml無菌水，將芽孢懸液接入鋸木屑菌種中，這樣菌種出耳率會(huì)得到提高。芽孢菌種在木屑基中不能萌發(fā)菌絲，如加上1—2%過磷酸鈣和1—2%骨粉則可萌發(fā)菌絲。用重新接種原寄主的方法也可起復(fù)壯作用。




6，怎樣培養(yǎng)真菌和殺滅真菌


接種：就是把 需要培養(yǎng)的 細(xì)菌和 真菌與培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基接觸，就算完成了 接種。接種根據(jù)需接種的物體的狀態(tài)可以分為：固體接種、液體接種、氣體接種固體接種，就拿硬幣做例子，用無菌鑷子夾起硬幣，把硬幣放在培養(yǎng)皿上（如果想要實(shí)驗(yàn)結(jié)果明顯，就把硬幣在培養(yǎng)基上用手指輕壓一下）液體接種，比如想檢測自來水，將把事先準(zhǔn)備好的自來水用無菌棉棒浸濕，然后把 無菌棉棒在 培養(yǎng)基上來回涂抹均勻氣體接種，（就非常簡單?。。┫霚y試車站內(nèi)的空氣，那么就站在車站的某處，然后把培養(yǎng)皿的蓋子打開，使培養(yǎng)基暴露在空氣下5——10分鐘，就算是接種了試驗(yàn)完了后，用福爾馬林溶液浸泡實(shí)驗(yàn)器材，就可起到殺菌作用了。要知道“細(xì)菌真菌無處不在”哦····   :-) 希望給你帶來幫助哦
摘　　要:CO2培養(yǎng)箱是實(shí)驗(yàn)室必備的儀器，但因其中需放置盛水容器而濕度較高，從而導(dǎo)致霉斑（經(jīng)培養(yǎng)鑒定為絲狀真菌）快速生長而影響工作，有礙觀瞻和可能導(dǎo)致試驗(yàn)樣本污染或院內(nèi)感染擴(kuò)散。雖使用了硫酸銅溶液、75％乙醇溶液或紫外線照射等多種消毒措施，仍然沒有顯著的效果。我們從文獻(xiàn)和實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，一般認(rèn)為不適合在這種情況下使用的市售高氯消毒片當(dāng)加大劑量和使用中和劑時(shí)，具有安全和徹底的去除這類霉斑的效果
高溫


7，在對細(xì)菌真菌的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)時(shí)一般要用兩套帶有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿一


答案c試題分析：細(xì)菌和真菌的生活需要一定的條件，如水分、適宜的溫度、還有有機(jī)物，因此首先要配制含有營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基，可以用牛肉汁加瓊脂熬制，然后把培養(yǎng)基和所有用具進(jìn)行高溫滅菌，目的是殺死培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿中的細(xì)菌和真菌，以防雜菌對實(shí)驗(yàn)的干擾，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，為防止高溫殺死細(xì)菌、真菌，要等冷卻后，在進(jìn)行接種，接種后放在溫暖的地方進(jìn)行恒溫培養(yǎng)，注意：定期觀察并詳細(xì)記錄實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象?？键c(diǎn)：本題考查的是高溫滅菌的目的。點(diǎn)評：此題為基礎(chǔ)題，解答此類題目的關(guān)鍵是熟記高溫滅菌的目的要求，可以從培養(yǎng)細(xì)菌、真菌的方法步驟、高溫滅菌的目的方面來分析。
對照實(shí)驗(yàn)是指在研究一種條件對研究對象的影響時(shí)，所進(jìn)行的除了這種條件不同之外，其他條件都相同的實(shí)驗(yàn)．這種不同的條件就是實(shí)驗(yàn)變量．一個(gè)探究實(shí)驗(yàn)中只能有一個(gè)實(shí)驗(yàn)變量，其他因素均處于相同理想狀態(tài)，這樣便于排除因其他因素的存在而影響、干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可能．在接種前，培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿應(yīng)經(jīng)過高溫滅菌處理，以殺死其內(nèi)混有的細(xì)菌或真菌的孢子等，以防雜菌對實(shí)驗(yàn)的干擾，排除實(shí)驗(yàn)外其它環(huán)境的污染．因此，在對細(xì)菌、真菌的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一般要用兩套帶有培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿．一套接種培養(yǎng)，一套不接種，也放在相同條件下培養(yǎng)，這后一套的操作是對照作用，充分說明培養(yǎng)皿內(nèi)的細(xì)菌來自手上．故選：B．


8，細(xì)菌真菌對照試驗(yàn)中要控制什么


控制大腦 非得要我完善回答 我隨便答答不行嗎 我很忙耶
細(xì)菌真菌對照試驗(yàn)中要控制（無關(guān)變量）
為什么要檢定藥品中的細(xì)菌和真菌總數(shù)，當(dāng)然是從藥品的安全性考慮。本來藥品是用于治療人的疾病的，如果帶有超過限度的菌類，就會(huì)給人體用藥帶來危害，甚至危及人的生命安全。 藥品的細(xì)菌、真菌檢查分為：“無菌檢查和微生物限度檢查”兩大類。具體看是什么劑型或作為什么用途的藥品。應(yīng)該作“無菌檢查還是微生物限度檢查”，《中國藥典》對此有明確規(guī)定。摘錄如下： 一、需要做無菌檢驗(yàn)的藥品制劑有：1.所有的注射劑 2.眼內(nèi)注射溶液、眼內(nèi)植入劑及供手術(shù)、傷口、角膜穿透傷用的眼用制劑 3.用于燒傷或嚴(yán)重創(chuàng)傷的軟膏劑、乳膏劑 4.植入劑 5.用于燒傷、創(chuàng)傷或潰瘍的氣霧劑 6.用于燒傷、創(chuàng)傷或潰瘍的噴霧劑 7.用于燒傷或創(chuàng)傷的局部用散劑 8.用于手術(shù)、耳部傷口或耳膜穿孔的滴耳劑與洗耳劑 9.用于手術(shù)創(chuàng)傷的鼻用制劑 10.沖洗劑 11.用于嚴(yán)重創(chuàng)傷的凝膠劑。 二、需要做微生物限度檢驗(yàn)的制劑有：(1).所有的中藥制劑都要求做微生物限度檢查（做過無菌檢驗(yàn)的除外 (2).除中藥制劑之外的丸劑、膠囊劑、顆粒劑、部分片劑不要求做微生物限度檢查 (3).要求做微生物限度檢查的制劑還有：1.片劑的口腔貼片、陰道片、陰道泡騰片、外用可溶片 2.栓劑 3.酊劑 4.軟膏劑、乳膏劑、糊劑 5.眼用制劑的液體制劑、眼用半固體及固體制劑 6糖漿劑 7.氣霧劑、粉霧劑、噴霧劑 8.膜劑 9.口服溶液、口服混懸劑、口服乳劑 10.散劑 11.耳用制劑 12.鼻用制劑 13.洗劑、灌腸劑 14.搽劑、涂劑、涂膜劑 15.凝膠劑。16.貼劑。   《中國藥典》里都有規(guī)定的。   參考資料：參見《中國藥典》


9，真菌的載片培養(yǎng)和形態(tài)觀察實(shí)驗(yàn)思考題


樓上對你只要?jiǎng)澓喠司托辛?/section>
答：1、真菌的劃線分離培養(yǎng)  培養(yǎng)基：將沙堡瓊脂培養(yǎng)基融化后，冷卻至45攝氏度，注入無菌平皿中，每皿15~20ml，做成平板備用。  接種：取待分離的材料少許，投入無菌水試管中，振蕩，使分離菌懸浮于水中，將接種環(huán)火焰滅菌后冷卻，取上述懸液，進(jìn)行平板劃線分離。  培養(yǎng)與觀察：劃線完畢后，置于28攝氏度溫箱培養(yǎng)2~5天，待形成子實(shí)器官后，取單個(gè)菌落部分，制片鏡檢。若只有一種菌，既得純培養(yǎng)物。如有雜菌可取培養(yǎng)物少許制成懸液，用作劃線分離，有時(shí)反復(fù)多次可獲得純種。也可在放大鏡下觀察，用無菌鑷子夾取一段分離的真菌菌絲，在平板上分離培養(yǎng)，即可得到真菌的純培養(yǎng)物。2、真菌在固體培養(yǎng)基上的生長表現(xiàn)：  酵母菌在固體培養(yǎng)基上菌落呈油脂狀或蠟質(zhì)狀，表面光滑、濕潤、粘稠，有的表面呈現(xiàn)粉粒狀，粗糙或褶皺，菌落邊緣整齊、缺損或帶絲狀。菌落顏色有乳白色、黃色、紅色等。將不同的霉菌在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)2~5d，可見霉菌有絨毛狀、絮狀、繩索狀等。大小依霉菌種類而異，很多霉菌的孢子和菌絲能產(chǎn)生色素，致使菌落表面、背面甚至培養(yǎng)基呈現(xiàn)不同的顏色，如黃色、綠色、黑色、橙色等。3、（1）酵母菌水浸片的制備：將美藍(lán)染色液或蒸餾水滴于干凈的載玻片中央，用接種環(huán)以無菌及操作取培養(yǎng)48h的酵母菌少許，均勻涂于液滴中，染色2~3min后加蓋玻片。注意切勿產(chǎn)生氣泡，然后低倍鏡和高倍鏡觀察其細(xì)胞形態(tài)、芽殖方式，注意酵母菌的形態(tài)、大小和芽體，同時(shí)可以根據(jù)是否染上顏色來區(qū)別死活細(xì)胞。 （2）挑取真菌孢子接入盛有滅菌水的試管中，震蕩試管制成孢子懸液，用滅菌滴管吸取滅菌后融化的固體培養(yǎng)基少許，滴于載玻片中央用接種環(huán)將孢子懸液接種在培養(yǎng)基四周將玻片加在培養(yǎng)基上，輕輕壓一下，在適宜溫度下培養(yǎng)，定期取出，低倍鏡下觀察孢子的著生狀態(tài)，菌絲的生長狀況等。


10，農(nóng)藥對真菌抑制作用的試驗(yàn)步驟


實(shí)驗(yàn)原理：　　培養(yǎng)基是供微生物生長的基物，分液體和固體兩種。按成分又可分為天然培養(yǎng)基、半組合培養(yǎng)基和組合培養(yǎng)基。培養(yǎng)真菌所用的培養(yǎng)基一般用馬鈴薯培養(yǎng)基，它是半組合培養(yǎng)基，制作比較簡單，且能夠完全滿足微生物的營養(yǎng)要求?！　缇菤⑺浪形⑸?，保證培養(yǎng)基不被雜菌污染的重要手段之一。滅菌的方法有四種：熱力滅菌、過濾滅菌、化學(xué)滅菌和物理滅菌。熱力滅菌在微生物滅菌中占主要地位，分干熱滅菌和濕熱滅菌。干熱滅菌是利用熱空氣來滅菌，將玻璃器皿等放入烘箱中加熱，一般用160-170℃處理1小時(shí)或150℃處理2小時(shí)，適用于經(jīng)高溫處理不易損壞的干燥物質(zhì)。濕熱滅菌，即高壓蒸汽滅菌，是將滅菌物放入滅菌鍋內(nèi)，維持一定的蒸汽壓力，一般為1公斤/cm2左右（相當(dāng)于121℃），維持半小時(shí)，以確保殺死所有微生物，適用于高溫高壓下不易分解變質(zhì)的物質(zhì)和玻璃器皿。濕熱滅菌比干熱滅菌效率高。　　病原菌接種培養(yǎng)是殺菌劑毒力測定經(jīng)常進(jìn)行的工作之一，因培養(yǎng)基性狀不同，可采用不同的接種方法。本實(shí)驗(yàn)是練習(xí)在固體培養(yǎng)基上接種。固體培養(yǎng)基的接種方法分傾注和斜面兩種接種方法。　　接種后的菌種，必須放在適溫下培養(yǎng)，在培養(yǎng)期間注意觀察菌種的生長情況和有無雜菌污染，溫度要保持恒溫，培養(yǎng)成熟的菌種必須很好地保存?！　≈饕獌x器及試材：　　1、實(shí)驗(yàn)器皿：培養(yǎng)皿、容量瓶、移液管、無菌水、PDA培養(yǎng)基 [注：以上器皿須經(jīng)滅菌。]  2、實(shí)驗(yàn)儀器：超凈工作臺(tái)、滅菌鍋、培養(yǎng)箱、打孔器、酒精燈等。　　實(shí)驗(yàn)方法與步驟：　?。ㄒ唬?、培養(yǎng)基的制作： 　　1、培養(yǎng)基的組成（PDA）： 去皮馬鈴薯塊  200克   葡萄糖（或蔗糖） 10-20克  瓊脂17-20克 水1000ml　　2、步驟：　?。?）、在大燒杯中加入1000ml的水，作上標(biāo)記； 　?。?）、稱取去皮馬鈴薯200克，切成小塊，放入盛有水的燒杯中，煮沸30分鐘左右，將薯塊撈出，留下汁液；　　（3）、稱取17-20克瓊脂（事先用水浸泡），加入燒杯中，煮溶后，稱取葡萄糖（或蔗糖）10-20克，加入汁液中溶解?！　。?）、加水至標(biāo)記處，趁熱用雙層紗布過濾； 　?。?）、將制好的培養(yǎng)基在未凝固前及時(shí)分裝。　?。ǘ?、濕熱滅菌：　　1、在滅菌鍋內(nèi)加入去離子水到指定高度；　　2、將須滅菌的物品放入滅菌鍋內(nèi)，將蓋封閉加熱；　　3、當(dāng)氣壓表指到0.3/ cm2　　時(shí)，排出鍋內(nèi)空氣；　　4、當(dāng)氣壓升到所須壓力（1公斤/ cm2　　，溫度121℃）時(shí)，維持壓力半小時(shí)； 5、滅菌完畢，緩慢放氣；　　6、取出鍋內(nèi)培養(yǎng)基，試管作成斜面，以備接種用。 　?。ㄈ⒉≡臃N和培養(yǎng)：　　1、試管斜面接種，用左手握好裝有斜面培養(yǎng)基的試管和菌種試管的底部，右手拔出棉塞，靠近酒精燈火焰，將接種針在酒精燈焰上灼燒后，直接挑取少量菌絲和孢子或連同帶菌的培養(yǎng)基小塊，放入斜面培養(yǎng)基試管內(nèi)，輕輕涂抹在斜面上。并在試管上注明菌種名稱、接種日期、組名?！　?shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：　　1、 注意滅菌操作的方法和滅菌鍋的使用方法?！　?、 病原菌的接種實(shí)驗(yàn)要注意無菌操作，整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作過程在無菌操作臺(tái)上完成?！　?shí)驗(yàn)結(jié)果處理：　　將接種后的菌種，放在適溫下（28℃培養(yǎng)箱中）培養(yǎng)。并在培養(yǎng)期間注意觀察菌種的生長情況和有無雜菌污染。
多得很，一般的農(nóng)藥銷售點(diǎn)都有，多菌靈 甲基硫菌靈 甲基托布津 殺毒礬 百菌清都行，出名的有瑞士先正達(dá) 山東曹達(dá)


                
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