本文目錄一覽新藥的動(dòng)物試驗(yàn)該怎么做是不是用小白鼠做實(shí)驗(yàn)分析藥物在它體內(nèi)2,常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的給藥方法有3,請(qǐng)教動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中如何解決藥物水溶性問(wèn)題4,藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用藥量計(jì)算5,如何決定細(xì)胞培養(yǎng)中的該細(xì)胞因子加入劑量6,給藥劑量臨床常用量動(dòng)物等……
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1,新藥的動(dòng)物試驗(yàn)該怎么做是不是用小白鼠做實(shí)驗(yàn)分析藥物在它體內(nèi)
具體看什么藥,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇比較多,不一定是小鼠,不過(guò)小鼠應(yīng)該是最經(jīng)濟(jì)的
2,常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的給藥方法有

3,請(qǐng)教動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中如何解決藥物水溶性問(wèn)題
吐溫不要加多,你可以做小試,百分之幾的加,吐溫過(guò)多對(duì)動(dòng)物有毒性,做出的結(jié)果就不準(zhǔn)確了。按照樓上的方法,可以試試,調(diào)整不同比例,以空白溶液作對(duì)照。另外,如果還是很難溶,建議模仿紫杉醇的配方,加點(diǎn)蓖麻油,但是量必須少于10%,否則毒性太大。
4,藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用藥量計(jì)算
靜注硫噴妥鈉劑量為100mg/kg,容量為1ml/kg,表示100mg|1ml.該藥0.5g=500mg,既是500|100=5ml, 兔體重2.2kg,容量為1ml/kg,表示,2.2*1=2.2ml所以應(yīng)配成5ml。注射的藥量是2.2ml推薦一個(gè)免費(fèi)教育教學(xué)資源下載網(wǎng)站-課件素材庫(kù) <a target="_blank">http://www.kjxy8.cn/caidown/</a>,教案/論文/反思/說(shuō)課/課件下載 /課本插圖/ 試題試卷/ 課件視頻教程/課件制作素材等資源約20多萬(wàn)條,相關(guān)教育教學(xué)資源應(yīng)有盡有,只有你想不到的,沒(méi)有你找不到的!
5,如何決定細(xì)胞培養(yǎng)中的該細(xì)胞因子加入劑量
博凌科為解答:臨床用藥濃度和細(xì)胞培養(yǎng)的藥物干預(yù)濃度無(wú)法直接換算,有兩方面原因,一是臨床用藥劑量不等同于血藥濃度,即使是已知的血藥濃度,也不等同于作用于靶 器官/細(xì)胞的藥物濃度。二是體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)是藥物作用于孤立的細(xì)胞,而細(xì)胞在體內(nèi)要受到眾多因素和內(nèi)環(huán)境的影響,對(duì)藥物的敏感性會(huì)有很大的不同。所以你的問(wèn)題很難回答,常規(guī)的實(shí)驗(yàn)思路是這樣的:(1)體外實(shí)驗(yàn),研究藥物對(duì)細(xì)胞是否有作用,如有作用,測(cè)出其量效關(guān)系和時(shí)效關(guān)系,進(jìn)一步研究其作用機(jī)理。(2)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)之前,研究一下該藥物在體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué),毒性等。(3)動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn),研究藥物作用的有效劑量給藥方式,進(jìn)一步闡述其機(jī)理。(4)臨床實(shí)驗(yàn)。所以對(duì)于你的問(wèn)題,我的想法是,不必拘泥于同臨床用藥劑量一致性的問(wèn)題。以該藥物的血清濃度為標(biāo)尺(10-12iu/l),上下呈10倍藥物濃度浮 動(dòng),如0.001 iu/l、0.01 iu/l、0.1 iu/l、1 iu/l、10 iu/l、100 iu/l做一次六孔板實(shí)驗(yàn),得到大致的有效濃度范圍后,按此道理再做一次六孔板實(shí)驗(yàn)(倍比關(guān)系),就可以確定其作用的量效關(guān)系了。最后選定理想的作用劑量 研究其對(duì)細(xì)胞具體功能的影響和機(jī)制等。胞外液也叫內(nèi)環(huán)境、腦脊液等:組織液(組織間隙液的簡(jiǎn)稱(chēng)),是多細(xì)胞動(dòng)物的細(xì)胞直接生活的體內(nèi)液體環(huán)境外界環(huán)境也叫外環(huán)境,是多細(xì)胞動(dòng)物個(gè)體生活的體外環(huán)境人體內(nèi)。占體液總量的三分之一,構(gòu)成了體內(nèi)細(xì)胞生活的液體環(huán)境.主要包括,存在于細(xì)胞外的體液叫做細(xì)胞外液(extracellular fluid ECF)。人體內(nèi)的細(xì)胞外液、血漿(血液的液體部分)和淋巴,這個(gè)液體環(huán)境叫做人體的內(nèi)環(huán)境
6,給藥劑量臨床常用量動(dòng)物等效面積系數(shù)培養(yǎng)基內(nèi)血清稀釋度中培養(yǎng)
有限稀釋法是一種常用的克隆方法。 將需要再克隆的細(xì)胞株自培養(yǎng)孔內(nèi)吸出并作細(xì)胞計(jì)數(shù),計(jì)出1mL的細(xì)胞數(shù)。 用HT培養(yǎng)液稀釋?zhuān)?使細(xì)胞濃度為50~60個(gè)/mL,于96孔培養(yǎng)板中每孔加0.1mL(五六個(gè)細(xì)胞/孔)。接種2排,剩余細(xì)胞懸液用HT培養(yǎng)液作倍比稀釋?zhuān)俳臃N2排,如此類(lèi)推,直至使每孔含0.5~1個(gè)細(xì)胞。培養(yǎng)7~10d后,選擇單個(gè)克隆生長(zhǎng)的陽(yáng)性孔再一次進(jìn)行克隆。一般需要如此重復(fù)3~5次,直至達(dá)100%陽(yáng)性孔率時(shí)即可,以確??贵w由單個(gè)克隆所產(chǎn)生。例如: 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞克隆化培養(yǎng)技術(shù)—有限稀釋法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?1、掌握用有限稀釋法進(jìn)行細(xì)胞克隆化培養(yǎng)技術(shù); 2、學(xué)會(huì)細(xì)胞克隆形成的辯觀察技能; 3、配合抗體分泌細(xì)胞篩選技術(shù),確定抗體分泌細(xì)胞。 二、實(shí)驗(yàn)原理: 克隆化培養(yǎng)即單細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),用有限稀釋法進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞克隆化培養(yǎng),可以及時(shí)確定陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株,同時(shí)淘汰因發(fā)生染色體丟失或抗體的輕、重鏈基因分離而出現(xiàn)無(wú)抗體分泌陰性細(xì)胞株。 一般雜交瘤細(xì)胞需經(jīng)過(guò)52—3次反復(fù)克隆后,才能達(dá)到100%細(xì)胞陽(yáng)性率。 該辦法亦適用于一般細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)胞純化、突變細(xì)胞株的選擇,識(shí)別和分離。是細(xì)胞株的常用方法。 三、實(shí)驗(yàn)材料: 雜交瘤細(xì)胞、25毫升培養(yǎng)瓶、96孔細(xì)胞培養(yǎng)板(天津有機(jī)玻璃廠)、移液管(1毫升、5毫升、10毫升)、彎頭滴管、倒置顯微鏡、CO2培養(yǎng)箱、白細(xì)胞計(jì)數(shù)板、計(jì)數(shù)器、蓋玻片、防水筆、RPMI-1640、小牛血清、青鏈霉素、10毫升刻度離心管,00橡膠塞,飼養(yǎng)細(xì)胞(3-6×105/ml、見(jiàn)腹腔細(xì)胞的制備)。 四、實(shí)驗(yàn)步驟: 1、分裝了每孔0.1毫升腹腔細(xì)胞的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板(可提前24小時(shí)準(zhǔn)備就緒,置CO2培養(yǎng)箱中備用); 2、自細(xì)胞培養(yǎng)瓶中收集長(zhǎng)勢(shì)良好的雜交瘤細(xì)胞(亦可自24孔培養(yǎng)板孔中收集),制成懸液。3、按白細(xì)胞計(jì)數(shù)方法準(zhǔn)確計(jì)得細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù),一般在105/毫升左右。 4、取3支10毫升刻度離心管排列在超凈工作臺(tái)試管架上,先用無(wú)血清培養(yǎng)基將細(xì)胞稀釋至103/毫升,再用含15%小牛血清的完全培養(yǎng)基稀釋到101/毫升細(xì)胞,即每0.1毫升1個(gè)細(xì)胞。 5、每孔0.1毫升細(xì)胞懸液。 6、置37℃5%CO2培養(yǎng)箱,4天后取出觀察,并在板蓋上打上標(biāo)記,做好記錄并統(tǒng)計(jì)結(jié)果。 7、繼續(xù)培養(yǎng)時(shí),則在第4-5天更換1/2培養(yǎng)基,約第7-9天可以收獲培養(yǎng)液上清用于檢測(cè)抗體。并重復(fù)檢測(cè)1-2次。 8、選擇單克隆生長(zhǎng)孔,生長(zhǎng)良好,陽(yáng)性強(qiáng)者,轉(zhuǎn)移到24孔板再做克隆經(jīng)培養(yǎng)或擴(kuò)大培養(yǎng)。 五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 實(shí)驗(yàn)結(jié)果以總細(xì)胞孔(如96孔)中出現(xiàn)克隆孔統(tǒng)計(jì)出克隆百分率,并可進(jìn)一步按單細(xì)胞孔、雙細(xì)胞孔、多細(xì)胞孔分別計(jì)算出百分率。 六、注意事項(xiàng): 1、注意無(wú)菌操作,一旦發(fā)現(xiàn)污染(孔)必須及時(shí)處理; 2、計(jì)數(shù)細(xì)胞要求準(zhǔn)確,稀釋量亦要準(zhǔn)確,否則將造成一孔多細(xì)胞克隆或克隆百分離太低; 3、在計(jì)數(shù)克隆出現(xiàn)率之前,不宜更換培養(yǎng)液,也不宜強(qiáng)烈振動(dòng)培養(yǎng)板; 4、做克隆化培養(yǎng)的小牛血清必須是優(yōu)質(zhì)血清; 5、若做克隆抗體檢測(cè)時(shí),特別要保護(hù)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況,防止細(xì)胞生長(zhǎng)不良甚至丟失。 七、說(shuō)明: 哺乳動(dòng)物細(xì)胞通過(guò)分離、稀釋接種,培養(yǎng)在適宜于單細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)液中,形成細(xì)胞克隆。運(yùn)用這項(xiàng)技術(shù)可以制作細(xì)胞成活曲線,即在接種相同數(shù)量細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中,加入不同濃度的化學(xué)藥品,或照以不同劑量的射線,觀察其對(duì)細(xì)胞的聽(tīng)見(jiàn)害程度。由此可以在哺乳類(lèi)細(xì)胞中進(jìn)行誘變?cè)囼?yàn)及分離突變細(xì)胞。

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