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• 1，給藥濃度乘以多糖提取率就是最后給動(dòng)物灌喂的濃度
• 2，請(qǐng)教 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中高中低劑量如何確定的及依據(jù)
• 3，抗生素單拷貝整合到染色體后用多大濃度篩選
• 4，請(qǐng)問(wèn)用HPLC測(cè)動(dòng)物血漿和內(nèi)臟內(nèi)藥物濃度之前該怎樣處理
• 5，不同給藥組動(dòng)物指標(biāo)比較用什么方法
• 6，動(dòng)物試驗(yàn)給藥劑量怎么定
• 7，給藥劑量臨床常用量動(dòng)物等效面積系數(shù)培養(yǎng)基內(nèi)血清稀釋度中培養(yǎng)

1，給藥濃度乘以多糖提取率就是最后給動(dòng)物灌喂的濃度

可以私聊我~

農(nóng)藥的比例是5%。糖比例是25%。??

2，請(qǐng)教 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中高中低劑量如何確定的及依據(jù)

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中高中低劑量如何確定的及依據(jù)1、先用少量小鼠粗略的摸索山毒劑量或致死劑量，然后用中毒劑量或致死劑量的若干分之作為應(yīng)用劑量，一般可取1／10-1／5。2、確定劑量后，如第一次實(shí)驗(yàn)的作用不明顯，動(dòng)物也沒(méi)有中毒的表現(xiàn)(體重下降、精神不振、活動(dòng)減少或其它癥狀)，可以加大劑量再次實(shí)驗(yàn)。如出現(xiàn)中毒現(xiàn)象，作用也明顯，則應(yīng)減少劑量再次實(shí)驗(yàn)。在一般情況下，在適宜劑量范圍內(nèi)，藥物的作用常隨劑量的加大而增強(qiáng)。所以有條件：時(shí)，最好同時(shí)用兒個(gè)劑量做實(shí)驗(yàn)，以便迅速獲得關(guān)于藥物作用的較完整的資料。如實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)劑量與作用強(qiáng)度毫無(wú)規(guī)律時(shí)，則更應(yīng)慎重分析。3、用人動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，開(kāi)始的劑量可采用給鼠類劑量的十五分之一至二分之一，以后可根據(jù)動(dòng)物的反應(yīng)調(diào)整劑量。4、確定動(dòng)物的給藥劑量時(shí)，要考慮給藥動(dòng)物的年齡大小和體質(zhì)強(qiáng)弱?！阏f(shuō)，確定的給藥劑量是指成年動(dòng)物的，如果幼小動(dòng)物，劑量應(yīng)減小。服量為100，灌胃量應(yīng)為100-200，皮下注射量為30—50，肌肉注射量為25—30，靜脈注射量為25。二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥量的計(jì)算方法動(dòng)物實(shí)驗(yàn)所用的藥物劑量一般按毫克／公斤體重或克／公斤體重計(jì)算，應(yīng)用時(shí)須從已知藥液的濃度換算十相當(dāng)于每公斤體重應(yīng)注射的藥液量(毫升數(shù))，以便給藥。三、人與動(dòng)物的給藥量換算方法人與動(dòng)物對(duì)同藥物的耐受性相差很大。一般說(shuō)來(lái)，動(dòng)物的耐受性比人大，也就是單位體重動(dòng)物的用藥量比人要人，近幾年來(lái)新藥藥效研究中多以下列公式計(jì)算：D2=D1×K2／K1×W1/W2D為藥物劑量，K為常數(shù)，W為動(dòng)物體重(kg)(1指人；2指動(dòng)物。人及不同種類動(dòng)物的K值不同，人1．6、猴11．2、兔10．1、大鼠9．1、小鼠9．1、鼠9．8、貓9．8。如一例體重為70kg的人，某藥劑量為20ug．kg-1．D-1，—只5kg重的猴為53．6 ug．kg-1．D-1，一只10kg重的大為40．4ug．kg-1．D-1，而一只20g重的小鼠為260．6 ug．kg-1．D-1(見(jiàn)表三)人用劑量與不同種類動(dòng)物間劑量的關(guān)系。

3，抗生素單拷貝整合到染色體后用多大濃度篩選

可以做150g/ml、 200g/ml、300g/ml三個(gè)濃度進(jìn)行篩選。　　為分析轉(zhuǎn)化的功能和表達(dá)需要DNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染至宿主細(xì)胞染色體.外源基因進(jìn)入細(xì)胞后,部分能夠通過(guò)細(xì)胞質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi),根據(jù)細(xì)胞類型,至多80%的進(jìn)入 核內(nèi)的外源DNA得到瞬時(shí)表達(dá).極少數(shù)情況下,進(jìn)入細(xì)胞的外源DNA通過(guò)系列非同源性分子間重組核連接,形成巨大的***結(jié)構(gòu)最終整合進(jìn)細(xì)胞染色體.細(xì)胞 基因組自由部分表達(dá),所以整合并不一定意味著表達(dá),只有整合到表達(dá)區(qū)的基因才會(huì)表達(dá),而且整合到不同的染色體區(qū)段的外源基因的表達(dá)的量也是不同的.由于攝 取、整合、表達(dá)外源基因是小概率事件,通常根據(jù)新表型篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染體?！　∫话闱闆r下這種新表型由共轉(zhuǎn)染的編碼抗生素抗性基因提供.細(xì)菌Tn5轉(zhuǎn)座子序列 （neo抗性基因）攜帶的氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶可以將G418轉(zhuǎn)變成無(wú)毒形式.G418是一種氨基糖類抗生素,其結(jié)構(gòu)與新霉素、慶大霉素、卡那霉素相似,它 通過(guò)影響80S核糖體功能而阻斷蛋白質(zhì)合成,對(duì)原核和真核等細(xì)胞都有毒性,包括細(xì)菌、酵母、植物和哺乳動(dòng)物細(xì)胞,也包括原生動(dòng)物和蠕蟲(chóng).是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染最常用 的選擇試劑.當(dāng)neo基因被整合進(jìn)真核細(xì)胞基因組合適的地方后,則能啟動(dòng)neo基因編碼的序列轉(zhuǎn)錄為mRNA,從而獲得抗性產(chǎn)物氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶的高效 表達(dá),使細(xì)胞獲得抗性而能在含有G418的選擇性培養(yǎng)基中生長(zhǎng).G418的這一選擇特性,已在基因轉(zhuǎn)移、基因敲除、抗性篩選以及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等方面得以廣泛 應(yīng)用.在進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞膜受到影響,抗生素可能對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生較大影響,加上G418有殺菌作用,所以有人主張轉(zhuǎn)讓時(shí)不加其它抗生素.其實(shí)G418本身有很好 的殺菌效果,在用G418進(jìn)行篩選的過(guò)程中很少會(huì)發(fā)生污染.但有一點(diǎn),在脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染時(shí)所 用培養(yǎng)基中最好不加任何抗生素.可能是脂質(zhì)體對(duì)細(xì)胞膜有影響,可能此時(shí)加抗生素對(duì)細(xì)胞損傷較大.因?yàn)閼c大霉素、鏈霉素、G418均是氨基糖甙 類藥物,其藥理作用完全一樣.所以沒(méi)有必要再用,而且由于另外抗生素的添加實(shí)際增加氨基糖甙類藥物的濃度,劑量有誤差,不利于各實(shí)驗(yàn)室之間的交流,在實(shí)際 操作中,培養(yǎng)液中有抗生素對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)與篩選影響不大.Protocal1.G418的配制： 取1g G418溶于1ml 1M的HEPES液中,加蒸餾水至10ml,過(guò)濾消毒,4度保存.2.細(xì)胞培養(yǎng)：取待測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞,制備成細(xì)胞懸液,按等量接種入多孔培養(yǎng)板中,培養(yǎng)6小時(shí)左右開(kāi)始加藥.3.制備篩選培養(yǎng)基：在100g/ml～1000g/ml范圍內(nèi)確定幾個(gè)梯度,比如先做個(gè)100g/ml、400g/ml、800g /ml、1000g/ml,按梯度濃度用培養(yǎng)基稀釋G418制成篩選培養(yǎng)基.4.加G418篩選： 吸除培養(yǎng)孔中培養(yǎng)基,PBS洗滌一次,每孔中加入不同濃度的篩選培養(yǎng)基.5.換液：根據(jù)培養(yǎng)基的顏色和細(xì)胞生長(zhǎng)情況,每3~5天更換一次篩選培養(yǎng)基.方法同4.6.確定最佳篩選濃度：在篩選10～14天內(nèi)能夠殺死所有細(xì)胞的最小G418濃度即為最佳篩選濃度.在第一輪就篩選出最佳G418濃度的可能性不 大,最有可能的是出現(xiàn)這種情況：用某一濃度G418的量在篩選14天后還不能殺死細(xì)胞,而用下一個(gè)梯度的G418的量在10天前就看不到活細(xì)胞了.假如是 400g/ml不能殺死細(xì)胞,而800g/ml在第5天就把所有細(xì)胞都?xì)⑺懒?則可以再用500g/ml、600g/ml、700g/ml進(jìn)一 步篩選,以確定最佳篩選濃度!心得：由于特性明確的細(xì)胞系G418的最佳用量還是比較穩(wěn)定的,所以有時(shí)候不需要在這么大范圍內(nèi)進(jìn)行篩選。

4，請(qǐng)問(wèn)用HPLC測(cè)動(dòng)物血漿和內(nèi)臟內(nèi)藥物濃度之前該怎樣處理

血液抗凝后離心,去上層血漿,再通過(guò)液-液萃取,沉淀蛋白或者固相萃取,(內(nèi)臟要低溫冷凍,然后勻漿,再提取,)然后通過(guò)HPLC測(cè)定,如果濃度很低,就要用液質(zhì)聯(lián)用.

同意樓上的，但LZ應(yīng)當(dāng)先建立方法學(xué)才是?。〔唤⒎椒▽W(xué)怎么可以就測(cè)樣呢？

5，不同給藥組動(dòng)物指標(biāo)比較用什么方法

不同給藥組動(dòng)物指標(biāo)比較用什么方法如果是同一組患者治療前后某項(xiàng)指標(biāo)的變化是否存在顯著差異，通?？梢圆捎门鋵?duì)樣本T檢驗(yàn)的方式進(jìn)行考察。如果是兩組患者，則需要具體分析了：（1）如果你所謂的兩組患者一組是病人，另一組是作為參照組（或者控制組，通常只是服用安慰劑）來(lái)處理的，那么指標(biāo)的變化可以通過(guò)獨(dú)立雙樣本T檢驗(yàn)的方法處理；（2）如果兩組患者并非這樣處理的，而是兩組病情程度不同的病人，那么由于兩組患者的基礎(chǔ)不同，建議分成兩組，分別采用配對(duì)樣本T檢驗(yàn)處理；（3）如果兩組患者的基礎(chǔ)一致（如病情程度類似，年齡、性別等分布類似），只是采用了兩種不同治療方案，則可以采用獨(dú)立雙樣本T檢驗(yàn)處理。

水分0.2-0.3 脂肪93.8 酸值 1.1-2.2 皂物價(jià)《200 碘值《47 融化脂肪應(yīng)透明，外部脂肪熔點(diǎn)48

6，動(dòng)物試驗(yàn)給藥劑量怎么定

ic50是半抑制率，意思是抑制率50%的時(shí)候藥物的濃度。把藥品稀釋成不同的濃度，然后計(jì)算各自的抑制率，以藥品的濃度為橫坐標(biāo)，抑制率為縱坐標(biāo)作圖，然后得到50%抑制率時(shí)候的藥品濃度，就是ic50。要點(diǎn)：藥品2倍稀釋，多做梯度，做點(diǎn)線圖即可!觀察一種藥物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的作用時(shí)，一個(gè)重要的問(wèn)題就是給動(dòng)物用多大的劑量較合適。劑量太小，作用不明顯，劑量太大，又可能引起動(dòng)物中毒致死?？梢园聪率龇椒ù_定劑量： 1. 先用少量小鼠粗略地探索中毒劑量或致死劑量,然后用小于中毒量的劑量

觀察一種藥物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的作用時(shí)，一個(gè)重要的問(wèn)題就是給動(dòng)物用多大的劑量較合適。劑量太小，作用不明顯，劑量太大，又可能引起動(dòng)物中毒致死?？梢园聪率龇椒ù_定劑量：1.先用少量小鼠粗略地探索中毒劑量或致死劑量,然后用小于中毒量的劑量，或取致死量的若干分之一作為應(yīng)用劑量，一般可取1/10～1/5。2.植物藥粗制劑的劑量多按生藥折算。3.化學(xué)藥品可參考化學(xué)結(jié)構(gòu)相似的已知藥物，特別是化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用都相似的劑量。4.確定劑量后，如第一次用藥的作用不明顯，動(dòng)物也沒(méi)有中毒的表現(xiàn),可以加大劑量再次實(shí)驗(yàn)。如出現(xiàn)中毒現(xiàn)象，作用也明顯，則應(yīng)降低劑量再次實(shí)驗(yàn)。在一般情況下，在適宜的劑量范圍內(nèi)，藥物的作用常隨劑量的加大而增強(qiáng)。所以有條件時(shí)，最好同時(shí)用幾個(gè)劑量作實(shí)驗(yàn)，以便迅速獲得關(guān)于藥物作用的較完整的資料。如實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)劑量與作用強(qiáng)度之間毫無(wú)規(guī)律時(shí)，則更應(yīng)慎重分析。5.用大動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，防止動(dòng)物中毒死亡,開(kāi)始的劑量可采用鼠類的1/15～1/2,以后可根據(jù)動(dòng)物的反應(yīng)調(diào)整劑量。6.確定動(dòng)物給藥劑量時(shí)，要考慮給藥動(dòng)物的年齡大小和體質(zhì)強(qiáng)弱。一般說(shuō)確定的給藥劑量是指成年動(dòng)物的，如是幼齡動(dòng)物，劑量應(yīng)減小。如以狗為例：6個(gè)月以上的狗給藥劑量為1份時(shí)，3～6個(gè)月的給1/2份，45～89日的給1/4份，20～44日的給1/8份，10～19日的給1/16份。7.確定動(dòng)物給藥劑量時(shí)，要考慮因給藥途徑不同，所用劑量也不同。以口服量為100時(shí)，皮下注射量為30～50，肌肉注射量為20～30，靜脈注射量為25。二、人與動(dòng)物的用藥量換算方法人與動(dòng)物對(duì)同一藥物耐受性不同，一般動(dòng)物的耐受性要比人大，單位體重的用藥量動(dòng)物比人要高。必須將人的用藥量換算成動(dòng)物的用藥量。一般可按下列比例換算：人用藥量：1小鼠、大鼠：50～100兔、豚鼠：15～20狗、貓：5～10以上系按單位體重口服用藥量換算。如給藥途徑為靜脈、皮下、腹腔注射，換算比例應(yīng)適當(dāng)減小些。

7，給藥劑量臨床常用量動(dòng)物等效面積系數(shù)培養(yǎng)基內(nèi)血清稀釋度中培養(yǎng)

雖然我很聰明，但這么說(shuō)真的難到我了

有限稀釋法是一種常用的克隆方法。 將需要再克隆的細(xì)胞株自培養(yǎng)孔內(nèi)吸出并作細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)出1mL的細(xì)胞數(shù)。 用HT培養(yǎng)液稀釋， 使細(xì)胞濃度為50～60個(gè)/mL，于96孔培養(yǎng)板中每孔加0.1mL(五六個(gè)細(xì)胞/孔)。接種2排，剩余細(xì)胞懸液用HT培養(yǎng)液作倍比稀釋，再接種2排，如此類推，直至使每孔含0.5～1個(gè)細(xì)胞。培養(yǎng)7～10d后，選擇單個(gè)克隆生長(zhǎng)的陽(yáng)性孔再一次進(jìn)行克隆。一般需要如此重復(fù)3～5次，直至達(dá)100％陽(yáng)性孔率時(shí)即可，以確?？贵w由單個(gè)克隆所產(chǎn)生。例如： 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞克隆化培養(yǎng)技術(shù)—有限稀釋法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?1、掌握用有限稀釋法進(jìn)行細(xì)胞克隆化培養(yǎng)技術(shù)； 2、學(xué)會(huì)細(xì)胞克隆形成的辯觀察技能； 3、配合抗體分泌細(xì)胞篩選技術(shù)，確定抗體分泌細(xì)胞。 二、實(shí)驗(yàn)原理： 克隆化培養(yǎng)即單細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，用有限稀釋法進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞克隆化培養(yǎng)，可以及時(shí)確定陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株，同時(shí)淘汰因發(fā)生染色體丟失或抗體的輕、重鏈基因分離而出現(xiàn)無(wú)抗體分泌陰性細(xì)胞株。 一般雜交瘤細(xì)胞需經(jīng)過(guò)52—3次反復(fù)克隆后，才能達(dá)到100%細(xì)胞陽(yáng)性率。 該辦法亦適用于一般細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)胞純化、突變細(xì)胞株的選擇，識(shí)別和分離。是細(xì)胞株的常用方法。 三、實(shí)驗(yàn)材料： 雜交瘤細(xì)胞、25毫升培養(yǎng)瓶、96孔細(xì)胞培養(yǎng)板（天津有機(jī)玻璃廠）、移液管（1毫升、5毫升、10毫升）、彎頭滴管、倒置顯微鏡、CO2培養(yǎng)箱、白細(xì)胞計(jì)數(shù)板、計(jì)數(shù)器、蓋玻片、防水筆、RPMI-1640、小牛血清、青鏈霉素、10毫升刻度離心管，00橡膠塞，飼養(yǎng)細(xì)胞（3-6×105/ml、見(jiàn)腹腔細(xì)胞的制備）。 四、實(shí)驗(yàn)步驟： 1、分裝了每孔0.1毫升腹腔細(xì)胞的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板（可提前24小時(shí)準(zhǔn)備就緒，置CO2培養(yǎng)箱中備用）； 2、自細(xì)胞培養(yǎng)瓶中收集長(zhǎng)勢(shì)良好的雜交瘤細(xì)胞（亦可自24孔培養(yǎng)板孔中收集），制成懸液。3、按白細(xì)胞計(jì)數(shù)方法準(zhǔn)確計(jì)得細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù)，一般在105/毫升左右。 4、取3支10毫升刻度離心管排列在超凈工作臺(tái)試管架上，先用無(wú)血清培養(yǎng)基將細(xì)胞稀釋至103/毫升，再用含15%小牛血清的完全培養(yǎng)基稀釋到101/毫升細(xì)胞，即每0.1毫升1個(gè)細(xì)胞。 5、每孔0.1毫升細(xì)胞懸液。 6、置37℃5%CO2培養(yǎng)箱，4天后取出觀察，并在板蓋上打上標(biāo)記，做好記錄并統(tǒng)計(jì)結(jié)果。 7、繼續(xù)培養(yǎng)時(shí)，則在第4-5天更換1/2培養(yǎng)基，約第7-9天可以收獲培養(yǎng)液上清用于檢測(cè)抗體。并重復(fù)檢測(cè)1-2次。 8、選擇單克隆生長(zhǎng)孔，生長(zhǎng)良好，陽(yáng)性強(qiáng)者，轉(zhuǎn)移到24孔板再做克隆經(jīng)培養(yǎng)或擴(kuò)大培養(yǎng)。 五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 實(shí)驗(yàn)結(jié)果以總細(xì)胞孔（如96孔）中出現(xiàn)克隆孔統(tǒng)計(jì)出克隆百分率，并可進(jìn)一步按單細(xì)胞孔、雙細(xì)胞孔、多細(xì)胞孔分別計(jì)算出百分率。 六、注意事項(xiàng)： 1、注意無(wú)菌操作，一旦發(fā)現(xiàn)污染（孔）必須及時(shí)處理； 2、計(jì)數(shù)細(xì)胞要求準(zhǔn)確，稀釋量亦要準(zhǔn)確，否則將造成一孔多細(xì)胞克隆或克隆百分離太低； 3、在計(jì)數(shù)克隆出現(xiàn)率之前，不宜更換培養(yǎng)液，也不宜強(qiáng)烈振動(dòng)培養(yǎng)板； 4、做克隆化培養(yǎng)的小牛血清必須是優(yōu)質(zhì)血清； 5、若做克隆抗體檢測(cè)時(shí)，特別要保護(hù)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況，防止細(xì)胞生長(zhǎng)不良甚至丟失。 七、說(shuō)明： 哺乳動(dòng)物細(xì)胞通過(guò)分離、稀釋接種，培養(yǎng)在適宜于單細(xì)胞生長(zhǎng)的培養(yǎng)液中，形成細(xì)胞克隆。運(yùn)用這項(xiàng)技術(shù)可以制作細(xì)胞成活曲線，即在接種相同數(shù)量細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中，加入不同濃度的化學(xué)藥品，或照以不同劑量的射線，觀察其對(duì)細(xì)胞的聽(tīng)見(jiàn)害程度。由此可以在哺乳類細(xì)胞中進(jìn)行誘變?cè)囼?yàn)及分離突變細(xì)胞。

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